免疫印迹
蛋白质印迹
免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(Western blotting),是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上,发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析。结合化学发光检测,可以同时比较多个样品同种蛋白的表达量差异。原理如图
基本原理
将混合抗原样品在凝胶板上进行单向或双向电泳分离,然后取固定化基质膜与凝胶相贴。在印迹纸的自然吸附力、电场力或其它外力作用下,使凝胶中的单一抗原组份转移到印迹纸上,并且固相化。最后应用免疫覆盖液技术如免疫同位素探针或免疫酶探针等,对抗原固定化基质膜进行检测和分析。
基本步骤
免疫印迹法( 以抗原分析为例)基本上可分为抗原分离、抗原印迹和抗原检定三个步骤。在每一步中因采用的具体实验方法不同,可构成多种免疫印迹分析系统。
优点
免疫印迹法是一项分析抗原、抗体的技术。
它具有下列优点:
1 湿的固定化基质膜柔韧,易于操作;
2 固定化的生物大分子可均一的与各种免疫探针接近,不会象凝胶那样受孔径阻隔;
3 免疫印迹分析只需少量试剂;
4 孵育、洗涤的时间明显减短;
5 可同时制作多个拷贝,用于多种分析和鉴定;
6 结果以图谱形式可长期保存;
7 免疫探针可通过降低PH值等方法,象抹去录音磁带一样将探针抹掉,再换用第二探针进行分析检测。免疫印迹法的应用范围及优点不仅局限于此,它必将随着这一方法的深入研究而不断发展和完善。
最新修订时间:2024-10-25 11:30
目录
概述
基本原理
基本步骤
优点
参考资料