免疫印迹(immunoblotting)又称
蛋白质印迹(Western blotting),是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在
凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上,发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫测定的高
特异性和敏感性,现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和
半定量分析。结合化学发光检测,可以同时比较多个样品同种蛋白的表达量差异。原理如图
将混合抗原样品在凝胶板上进行单向或双向电泳分离,然后取
固定化基质膜与凝胶相贴。在印迹纸的自然吸附力、
电场力或其它外力作用下,使凝胶中的单一抗原组份转移到印迹纸上,并且固相化。最后应用免疫覆盖液技术如免疫同位素探针或免疫酶探针等,对抗原固定化基质膜进行检测和分析。
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固定化的生物大分子可均一的与各种免疫探针接近,不会象凝胶那样受孔径阻隔;
7 免疫探针可通过降低PH值等方法,象抹去录音磁带一样将探针抹掉,再换用第二探针进行分析检测。
免疫印迹法的应用范围及优点不仅局限于此,它必将随着这一方法的深入研究而不断发展和完善。